1. Los métodos de tinción más utilizados incluyen la tinción de Gram (la más básica), la tinción de esporas, la tinción de cápsulas, la tinción de flagelos, etc.
II.1 Método de tinción de Gram (1) Tome una muestra de la solución bacteriana mixta que contiene Staphylococcus aureus y Escherichia coli, séquela y fíjela (2) Tinción: use una solución de tinción violeta cristal. minuto, enjuague con agua; tinte con solución de yodo de Lugol durante 1 minuto, enjuague con agua con solución de alcohol de fucsina al 0,4% durante 30 segundos, enjuague con agua (3) Seque y luego someta a examen microscópico;
1.2 Método de tinción ácido-alcohol resistente (1) Tomar muestras de frotis (procesadas) que sean positivas para Mycobacterium tuberculosis, secarlas y fijarlas. (2) Teñido: bañar el tinte fucsina de ácido carbólico en agua hirviendo durante 10 minutos, agregar de 2 a 3 gotas para cubrir la película bacteriana durante 5 minutos, enjuagar con agua, decolorar con alcohol de ácido clorhídrico al 3% durante 30 segundos, enjuagar con agua ; contrateñir con melanina alcalina durante 30 segundos, enjuagar con agua ; (3) Seque y luego realice un examen microscópico [3].
1.3 Método de tinción de cápsulas (1) Tomar una muestra del líquido peritoneal de un ratón que murió después de ser inoculado con bacterias neumocócicas, secarlo y fijarlo (2) Tinción: teñir con ácido carbólico-fucsina para; 1 minuto y enjuagar con agua; 95 Decolorar con % de alcohol por 5 segundos y enjuagar con agua con solución de ácido tánico al 20% por 10 minutos y enjuagar con agua de tinte con solución de verde malaquita al 0,8% por 1 minuto y enjuagar con agua; (3) Seque y luego someta a un examen microscópico [4].
1.4 Método de tinción de esporas (1) Tome cantidades iguales de líquido de cultivo anaeróbico de bacilos del tétanos y una solución acuosa de verde de malaquita al 5 %, colóquelas en un tubo de ensayo pequeño, mézclelas bien y báñelas en agua hirviendo durante 20 minutos; tomar una muestra de la mezcla anterior, secar y fijar; (2) contrateñir con una solución de color amarillo arena al 1% durante 10 minutos, enjuagar con agua (3) inspeccionar al microscopio después del secado;
2.1 Tinción de Gram Bajo el microscopio, Staphylococcus aureus se tiñe de color púrpura y es esférico, que es una bacteria Gram positiva; Escherichia coli se tiñe de rojo y tiene forma de bastón, que es una bacteria Gram negativa. La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más clásicos y utilizados en bacteriología. La decoloración es un paso clave que afecta la tinción de Gram, y la duración del tiempo de decoloración está directamente relacionada con la precisión de los resultados de la tinción [5]. Si la decoloración es excesiva, las bacterias Gram positivas pueden teñirse por error como bacterias Gram negativas. Si la decoloración es insuficiente, las bacterias Gram negativas pueden teñirse por error como bacterias Gram positivas. Esto es difícil de comprender para los estudiantes. El método de tinción original de cuatro pasos ahora se cambia a un método de tres pasos, es decir, el tercer paso de decoloración con alcohol y el cuarto paso de contratinción con fucsina se combinan en un solo paso, y se utiliza una solución de alcohol de fucsina al 0,4 % como contratinción. para lograr decoloración y contratinción. De esta manera, los estudiantes pueden evitar fallas en el teñido debido a la dificultad para dominar el tiempo de decoloración en el método de cuatro pasos, reducir los experimentos repetitivos y mejorar el efecto de enseñanza.
2.2 Tinción acidorresistente Bajo el microscopio, Mycobacterium tuberculosis se tiñe de rojo y son bacterias acidorresistentes; el fondo y otras bacterias se tiñen de azul y son bacterias no acidorresistentes. El método tradicional consiste en dejar caer tinte de ácido fénico y fucsina sobre el frotis, sostener el frotis con un portaobjetos de vidrio y calentarlo con hojas de tabaco, y mantener la solución de tinte humeante durante unos 5 minutos. Este método puede hacer que la solución de tinte se evapore fácilmente. o hacer que el tinte se vaporice. El líquido hierve, afectando así el efecto del teñido y contaminando el medio ambiente. El método mejorado consiste en calentar directamente la solución de tinte y usarla en un baño de agua, lo que supera las deficiencias anteriores y logra buenos resultados de teñido. Adecuado para la enseñanza experimental.
2.3 Tinción de la cápsula Bajo el microscopio, las células neumocócicas se tiñen de rojo (dispuestas en pares) y la cápsula se tiñe de verde y existe alrededor de las células. La tinción de cápsulas tradicional utiliza una solución de tinte violeta cristal. Las bacterias se tiñen de color púrpura y la cápsula se tiñe de color lavanda o incolora. El contraste entre las bacterias y la cápsula es pequeño y difícil de distinguir. Después de la mejora, se agregaron los pasos de decoloración, teñido con mordiente y contratinción para aumentar el contraste entre las bacterias y la cápsula, haciéndola más fácil de observar y puede usarse para experimentos de estudiantes y la producción de películas didácticas.
2.4 Tinción de esporas Bajo el microscopio, las células del bacilo del tétanos se tiñen de rojo y las esporas se tiñen de verde. El método tradicional consiste en dejar caer tinte de ácido fénico y fucsina sobre el frotis y calentarlo a fuego lento para permitir que el tinte se vaporice durante unos 5 minutos. Este método utiliza una gran cantidad de tinte y puede contaminar fácilmente la ropa y los bancos de experimentación. Ahora, el método consiste en mezclar una solución bacteriana y una solución de tinte en un baño de agua y calentarla para el teñido primario, y luego preparar el frotis, la fijación y la contratinción, lo que ahorra tiempo, consume menos solución de tinte y proporciona un contraste nítido entre las bacterias y las esporas. . Este método es adecuado para la producción de especímenes didácticos.
3. La tinción simple es un método que utiliza un único tinte para teñir las bacterias.
Pasos de la operación
1. Frotis: utilice un asa de inoculación esterilizada y enfriada para seleccionar una pequeña cantidad de bacterias y mézclelas bien con gotas de agua para formar una película bacteriana muy fina.
2. Secado: Se puede secar de forma natural o poner la masa a fuego alto para que se seque con un ligero calor, pero no se puede hornear directamente sobre la llama.
3. Fijación: Sostenga un extremo del portaobjetos de vidrio con el lado con la película bacteriana hacia arriba y páselo rápidamente por la llama 2-3 veces (toque la parte posterior del frotis con los dedos para evitar quemarse las manos).
4. Teñido: Añadir una cantidad adecuada de solución de tinte violeta cristal (o solución de ácido carbólico-fucsina) (medida cubriendo la membrana bacteriana) y teñir durante 1 a 2 minutos.
5. Lavado con agua: Enjuague con el grifo hasta que no haya color de líquido teñido en el agua que fluye.
6. Secado
7. Examen microscópico