Las tres etapas de la tecnología PCR son: desnaturalización, hibridación y extensión. La introducción específica es la siguiente:
1. Desnaturalización:
Después de calentar el ADN molde a aproximadamente 93 °C durante un cierto período de tiempo, el ADN bicatenario del molde. El ADN o el ADN bicatenario formado por amplificación por PCR se disuelve y se separa en una sola hebra para que pueda unirse al cebador y prepararse para la siguiente ronda de reacción.
2. Recocido:
Después de que el ADN molde se calienta y se desnaturaliza en una sola cadena, la temperatura desciende a aproximadamente 55 °C y el cebador se empareja con la secuencia complementaria del ADN. Plantilla de ADN monocatenario.
3. Extensión:
Bajo la acción de la TaqDNA polimerasa, se utiliza dNTP como materia prima de la reacción, la secuencia objetivo se utiliza como plantilla y se sintetiza una secuencia de ADN de acuerdo con ello. a los principios de emparejamiento complementario de bases y replicación semiconservadora. La nueva cadena replicada semiconservada es complementaria a la cadena de ADN molde. Al repetir los tres procesos de desnaturalización-recocido-extensión cíclica, se pueden obtener más "cadenas de replicación semiconservadas".
Aplicación de la tecnología PCR
1. Diagnóstico clínico:
La tecnología PCR se utiliza ampliamente en el diagnóstico clínico, especialmente para enfermedades infecciosas y genéticas. Al detectar patógenos o genes específicos, la PCR puede ayudar a los médicos a diagnosticar enfermedades de forma rápida y precisa.
2. Clonación y expresión de genes:
La PCR se puede utilizar para clonar fragmentos de genes específicos y expresarlos. Esto ayuda a estudiar la función y el mecanismo regulador de los genes y proporciona una base para el desarrollo de fármacos y la terapia génica.
3. Genotipado:
La PCR se puede utilizar para detectar cambios en la secuencia de alelos en células u organismos específicos para realizar el genotipado. Esto tiene un valor importante en la investigación genética, la identificación forense y la investigación antropológica.
4. Terapia génica:
La tecnología PCR puede amplificar la expresión de genes específicos para lograr el propósito de tratar enfermedades genéticas.
5. Biotecnología y agricultura:
La tecnología PCR también es ampliamente utilizada en biotecnología y agricultura, como en genómica, proteómica, mejora genética de cultivos, etc. La tecnología PCR se puede utilizar para identificar rastros de evidencia, como el ADN dejado en ataques bioterroristas y escenas de crímenes.