Qué es el método Westernblot: El método Westernblot es una tecnología que combina la electroforesis con KIJSA. Se puede dividir en tres etapas: electroforesis, transferencia e inmunoensayo enzimático. El método Westernblot combina la alta resolución de la electroforesis con la alta sensibilidad y especificidad del inmunoensayo enzimático. Es un ensayo inmunológico que se puede utilizar para analizar los componentes de la muestra. Aplicación del método Westernblot: el método Westernblot es un método experimental que se utiliza a menudo en biología molecular, bioquímica e inmunogenética, y es un método que puede realizar análisis cualitativos y semicuantitativos de proteínas. Las células o muestras de tejido biológico procesadas mediante electroforesis en gel se tiñen con anticuerpos específicos y la información sobre la expresión de proteínas específicas en las células o tejidos analizados se obtiene analizando la posición y la profundidad de la tinción. El método de hibridación Western utilizado en el análisis de proteínas es similar al método de hibridación Southern utilizado en el análisis de ADN. Ambos transfieren los componentes separados por corriente eléctrica del gel a un soporte sólido y ambos se utilizan para apuntar a aminoácidos específicos (método Westernblot). ácido nucleico. Se utilizan muestras específicas preparadas a partir de secuencias de nucleótidos (método de hibridación Southern) como sondas para detectar secuencias iguales o similares. Para las proteínas, las sondas comúnmente utilizadas son anticuerpos que reaccionan específicamente con un epítopo presentado por la proteína diana unida a un soporte sólido. La principal ventaja del método Westernblot es que puede detectar e identificar varias proteínas específicas a partir de extractos crudos o extractos crudos parcialmente purificados de tejidos biológicos. Las proteínas separadas mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) se transfieren del gel de poliacrilamida a una membrana de transferencia adecuada y luego se utilizan anticuerpos acoplados a un sistema de detección sensible para identificar las proteínas unidas a una o más proteínas. La sensibilidad de esta técnica puede alcanzar el nivel del radioinmunoensayo estándar en fase sólida sin la necesidad de marcaje radiactivo de las proteínas diana como en los métodos de inmunoprecipitación. Por lo tanto, Westernblot es extremadamente útil para identificar y cuantificar proteínas específicas en una mezcla compleja de proteínas no marcadas radiactivamente. Además, dado que la separación electroforética de proteínas casi siempre se realiza en condiciones desnaturalizantes, no es necesario considerar cuestiones como la solubilización, agregación y precipitación de proteínas diana y extrañas. El tanque de transferencia Bio-rad Trans-Blot es un instrumento multifuncional adecuado para una variedad de aplicaciones del método Westernblot. Múltiples conjuntos de parámetros se pueden configurar de manera flexible y ajustes de voltaje ajustables (desde 30 V para transferencia nocturna hasta 200 V para experimentos rápidos de 1 hora). La separación entre electrodos se establece en 8 cm para transferencia estándar y en 4 cm para transferencia de alta intensidad. Utiliza un núcleo de enfriamiento premium y un dispositivo de enfriamiento por circulación de agua para regular la temperatura, ideal para enzimas nativas (4 °C) o transferencias de alta intensidad sin provocar el agotamiento del buffer a medida que aumenta el tiempo de transferencia (hasta 24 horas).