El método de hibridación de ácidos nucleicos es una técnica estándar en biología molecular, que se utiliza para detectar secuencias específicas (secuencias objetivo) de moléculas de ADN o ARN. El método clásico de hibridación de ácidos nucleicos consiste en transferir y fijar primero el ADN o el ARN. En una membrana de nitrocelulosa o nailon, la sonda complementaria de ADN o ARN monocatenario se marca de forma radiactiva o no radiactiva. Cuando se hibrida en la membrana, la sonda se une a su secuencia objetivo complementaria a través de enlaces de hidrógeno y la sonda libre no unida se lava. Después de la aguja, la sonda específicamente unida se detecta mediante autorradiografía o reacción cromogénica.
Los métodos de hibridación computacional clásicos incluyen principalmente: Southern blot, Northern blot e hibridación dot blot e hibridación in situ:
1. Hibridación por transferencia de ADN: existen dos métodos de transferencia de ácido nucleico:
Solución localizada de ADN o ARN directamente sobre una membrana de nitrocelulosa o membrana de nailon (transferencia por puntos o por ranuras)
Transferencia el ADN o ARN fragmentado a la membrana mediante electroforesis en gel de agarosa (transferencia Southern y Northern). El ADN se restringe antes de la digestión con endonucleasa.
Hibridación por transferencia de ARN:
transferencia de ARN. La hibridación es un método específico para detectar ARN total o ARNm que se ha fijado en la tecnología de secuencia objetivo.
3. Hibridación por transferencia puntual.
Detecta una pequeña cantidad de ácido nucleico. Muestra en la membrana del filtro de nitrocelulosa y hornéela a 80 ℃ para fijarla firmemente en la membrana. Luego use una sonda para la hibridación. La membrana de nailon, especialmente el fluoruro de polivinilideno (PVDF), tiene una mayor fuerza de unión al ADN, es resistente y fácil de usar. operar el muestreo se puede realizar manualmente, o la muestra se puede detectar manualmente. La detección se puede realizar mediante autorradiografía con sonda radiactiva o desarrollo de color con sonda no radiactiva.
4. Hibridación in situ
La hibridación intracelular, el desarrollo o el desarrollo del color se realizan manteniendo la morfología celular. Puede usarse para análisis de ADN o ARN. La hibridación fluorescente in situ (FISH) puede usarse en análisis de ADN cromosómico. muchas áreas de investigación biológica, así como estudios citogenéticos clínicos. Su principal ventaja es que puede usarse no solo durante la metafase de la división celular, sino también entre divisiones.
Hibridación de ácidos nucleicos. en un sentido amplio se refiere al proceso de renaturalización (enlaces de hidrógeno) entre moléculas de ácido nucleico no homólogas. Por lo tanto, se puede decir que la tecnología de pruebas genéticas actual, además de los principios cualitativos de la hibridación de ácidos nucleicos, está más o menos involucrado en. la popularización de leyes, como el proceso de renaturalización del cebador de la PCR, el proceso de detección de hibridación de chips genéticos, el proceso de renaturalización del cebador de la secuenciación de genes, varios métodos de detección de SNP, etc.